Terapia celular CAR-T: principales componentes, fabricación y perspectivas

• Las células Th ayudarán a la respuesta inmunitaria mediante la liberación de citocinas.
• Las células TC, por otro lado, están involucradas en la destrucción de las células infectadas viralmente y las células tumorales.

Los linfocitos T reguladores son CD4+ y CD25+ desempeñan un papel crucial en el cese de la inmunidad mediada por linfocitos T y, por lo tanto, estas células son capaces de controlar y suprimir la respuesta inmunitaria.

Células T específicas de antígeno que permanecen en el cuerpo después de la infección (memoria inmunológica).

Unión específica de las células T al antígeno diana de forma independiente del MHC.

Facilita el acceso al Ag.

Anclaje del CAR en la membrana celular (influye en la estabilidad y función del CAR).

Por lo general, contiene el dominio de activación (CD3ζ) y uno (o más) dominios coestimuladores (CD28, 4-1BB, ....). Las diferentes generaciones de CAR se definen en función del diseño de sus dominios de señalización⁶.

La donación, la obtención y las pruebas de células para ATMP deben realizarse de acuerdo con la Directiva 2004/23/CE9 sobre tejidos humanos (Reg1394/2007 (14)).

Los donantes (pacientes) se someterán a una leucoféresis. La leucoféresis es una técnica específica de separación en la que se recogen los componentes celulares de la sangre y más concretamente los leucocitos (glóbulos blancos). Estas células mononucleares de sangre periférica (PBMC) contienen los diferentes linfocitos (células T/células B/células NK) y monocitos (macrófagos, células dendríticas). Los contaminantes, como los glóbulos rojos y las plaquetas, pueden eliminarse mediante el lavado10. El lavado y enriquecimiento mononuclear (linfocitos y monocitos) se realiza mediante el uso de dispositivos como el lavador de células Lovo (Fresenius Kabi), el Terumo COBE 2991 (Terumo BCT) y el dispositivo Sepax (Sepax Technologies Inc.)¹⁰.

La condición médica del donante autólogo afectará el rendimiento y la pureza del producto CAR-T. Por lo tanto, se deben establecer criterios de elegibilidad de los donantes antes de iniciar la terapia CAR-T y se deben aplicar los procedimientos y normas aplicables para limitar la variabilidad del material.

La figura 5 incluye un recuadro morado que muestra los pasos 2 a 5, ya que estos pasos deben cumplir con los requisitos establecidos en EudraLex Volumen 4 Parte IV – Requisitos de GMP para medicamentos de terapia avanzada¹¹.

Después de la leucoféresis y el lavado, los subconjuntos de linfocitos T (CD4, CD8, CD25, etc.) se enriquecen mediante el uso de la separación inmunomagnética en los dispositivos Miltenyi CliniMAC y Prodigy)10. Este paso se realiza seleccionando células CD4+, CD8+, CD25+ utilizando perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-CD4, anti-CD8 y anti-CD25. Estas células T procesadas pueden utilizarse directamente en procesos posteriores o criopreservarse para su uso posterior.

En el siguiente paso del proceso, se activan las células T, a lo que sigue la proliferación de las células T mediante la adición de citocinas específicas. La activación de los linfocitos T se obtiene simulando la unión simultánea in vivo del receptor de linfocitos T CD3 y el correceptor CD28 a su ligando, a saber, CD80/86 y MHC, que están representados in vitro por dos anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 unidos adherido a una perla inmunomagnética (Dynal Dynabeads: Human TActivator) o perlas Miltenyi (TransAct)¹⁰. 

Other activation methods are also reported, for example, the use of Expamer (trademarked by Juno Therapeutics). Here, a soluble StrepTactin protein oligomer forms the backbone for the anti-CD3 and anti-CD28 ligands¹⁰.

En la actualidad, los dispositivos más utilizados son el G-Rex (Wilson Wolf Manufacturing), el Biorreactor Wave (GE Life Systems) y el CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec)10. Para la transducción de los linfocitos T se utilizan principalmente vectores γ-retrovirales y vectores lentivirales que se añaden al vaso específico en el que se encuentran los linfocitos T. También se están investigando otros métodos no virales, como el sistema transposón/transposasa o la transferencia de ARNm por electroporación10.

Dado que estas células T se someten a modificaciones genéticas, los productos de células CAR-T también deben cumplir con los requisitos de organismos genéticamente modificados (OGM). Esto puede ser un gran desafío, ya que las directivas de la UE sobre OGM se implementan e interpretan de manera diferente en los diferentes Estados miembros de la UE. Los obstáculos regulatorios deben superarse de manera oportuna para obtener la aprobación para la ejecución de ensayos clínicos y, en última instancia, la autorización de comercialización. Consulta con nuestro departamento de regulación si tienes alguna pregunta. 

Después de una transducción exitosa, las células CAR-T se expanden. El objetivo de este último paso es aumentar el número de células transducidas que expresan CAR y, en última instancia, obtener la cantidad deseada de células. Por ejemplo, los pacientes adultos jóvenes (50 kg o menos) con LLA de células B que reciben Kymriah necesitarán la siguiente dosis: 0,2 a 5 x 106 células T viables CAR-positivas/kg de peso corporal. El medicamento en sí contendrá 1 o más bolsas de perfusión, cada una de las cuales contendrá de 1,2 x 106 a 6 x 108 células T viables CAR-positivas. Dado que se necesitan millones de células, el rendimiento es un factor muy importante a tener en cuenta para estos tratamientos autólogos.

Después de la expansión, las células recolectadas se lavan y centrifugan. Se añaden crioprotectores para la criopreservación del fármaco. El método más utilizado es la resuspensión en un medio de almacenamiento que contenga un 10% de dimetilsulfóxido, seguido del almacenamiento en nitrógeno líquido en la fase de vapor ¹⁰.

Antes de que el producto pueda administrarse al paciente a través de una perfusión, el paciente debe someterse a una terapia de acondicionamiento, es decir, a la linfodepleción por quimioterapia.